Применение культуры клеток
Прежде чем Вы решите использовать в качестве объекта или средства исследования клеточные культуры, Вы должны убедиться, что те преимущества, которые Вы при этом получаете, перекроют сопряжённые с данным методом трудности.
Некоторые преимущества культуры клеток:
Главное преимущество культивируемых клеток - это возможность прижизненного наблюдения клеток с помощью микроскопа.
Существенно, что при работе с культурами клеток в эксперименте используются здоровые клетки, и они сохраняют жизнеспособность в течение всего эксперимента. При опытах на целом животном состояние почек, например, можно оценить лишь в конце эксперимента, и к тому же обычно лишь качественно.
Культуры клеток представляют собой генетически однородную популяцию клеток, растущих в постоянных условиях. Более того, исследователь может изменять эти условия в определённых пределах, что позволяет ему оценивать влияние на рост клеток самых различных факторов - рН, температуры, концентрации аминокислот, витаминов и др. Рост может быть оценен в течение короткого периода времени либо по увеличению числа или размеров клеток, либо по включению радиоактивных предшественников в клеточную ДНК.
Эти реальные преимущества по сравнению с исследованиями на целых животных ставят клеточные культуры как экспериментальную систему в один ряд с культурами микроорганизмов.
Более того, при работе с культурами клеток существенные результаты могут быть получены при использовании очень небольшого числа клеток. Эксперименты, требующие для выяснения того или иного вопроса использования 100 крыс или 1000 человек, могут быть с равной статистической достоверностью поставлены на 100 культурах на покровных стёклах. Т. о. одна клетка может заменить целую клинику больных. Это является важным преимуществом, когда дело касается человека, и, кроме того, снимает многие этические проблемы, возникающими при необходимости использовать для эксперимента большую группу животных.
Поскольку клетки в культуре легко доступны для различных биохимических манипуляций, то при работе с ними радиоактивные предшественники, яды, гормоны и др. могут быть введены в заданной концентрации и в течение заданного периода. Количество этих соединений может быть на порядок меньше, чем при экспериментах на целом животном. Исчезает также опасность того, что исследуемое соединение метаболизируется печенью, запасается мышцами или экскретируется почками. При использовании клеточных культур, как правило, бывает нетрудно установить, что при определённой концентрации добавленное в культуру вещество находится в контакте с клетками в течение данного периода времени. Это обеспечивает получение реальных значений скорости включения или метаболизма исследуемых соединений.
Культура клеток используется в различных научных и практических областях:
- Генетика
Способность клеток к росту в культуре привела к развитию следующих методов:
- Клонирование
- Хранение и слияние клеток
- Получение и работа с мутантными клетками.
- Иммунология
Гибридомная технология:
клетки, синтезирующие интересующие ученых антитела, подвергают процедуре слияния с клетками миеломы, которые продуцируют антитела с неизвестной специфичностью.
Полученные гибридомы позволили наладить производство моноклональных антител: мышь иммунизируется неочищенным препаратом антигена и затем клетки её селезёнки гибридизуют с клетками миеломы. Среди полученных гибридных клеток найдётся по крайней мере одна, продуцирующая антитела, специфические к исходному антигену.
Биотехнология:
Культуры клеток могут стать ценным источником гормонов и других секретируемых материалов. Культуры клеток уже сейчас оказываются важными продуцентами видоспецифического противовирусного агента интерферона.
Вирусология и трансформация клеток:
Прогресс в области вирусологии в значительной степени обусловлен возможностью выращивать вирусы в культурах клеток.
В результате применения этих методов выяснилось, что вирусы способны не только инфицировать и убивать клетки, но могут также вызывать изменения в характере роста клеток - феномен, известный как вирусная трансформация клеток. Эти изменения, приводящие к появлению клеток, не реагирующих на своих соседей так, как это характерно для нетрансформированных клеток, вызывают особый интерес в связи с тем, что они могут помочь понять природу трансформации, поскольку сходные изменения, происходящие с клетками in vitro, играют определенную роль в индукции опухоли.
Так как в настоящее время большая часть вирусных заболеваний лечится путем введения антисыворотки, выращивание вирусов имеет важное значение как для идентификации вирусов, так и для их использования в получении вакцины.
Эти задачи решаются в основном с использованием клеточных культур.